Caractérisation biochimique des Amylases Isolées à partir des souches d'actinomycètes extrait des échenillons tellurique de la région de souk ahras

Abstract

The present study is devoted to the biochemical characterization of amylases isolated from autochthonous telluric actinomycetes of the Souk Ahras region. Thus, the amylolytic activity of five strains of Actinobacteria, in particular: S213, S331, S351, S551, S552 was tested with the aim of producing amylolytic enzymes. This was carried out by two tests: A qualitative test (the iodine test) which makes it possible to observe the hydrolysis of starch by amylolytic enzymes on the solid medium Nutrient agar (GN) based on starch which allows to observe clear zones around the colonies (halos), The diameter ratio made it possible to classify the strains by order of activity. One strain seems to be more active compared to other actinomycete strains, this is the case of the S331 strain. These results are confirmed by a quantitative colorimetric test by determining the appearance of reducing sugars following the hydrolysis of starch (Assay of amylolytic activity by the method of Miller with the reagent of DNS. These various tests made it possible to choose the most active strain. This is the S331 strain which has been the subject of a more in-depth study. Also, the production of amylolytic enzymes was carried out on a specific starch-based YST liquid medium. Subsequently, a protocol for the partial purification of the amylolytic enzymes was carried out using the 20% acetone fractionation method. The biochemical characterization of the isolated enzymatic fraction was carried out, concerning the following physicochemical parameters: pH, Temperature, effect Finally, an attempt to determine the mode of attack of the enzyme was carried out by the method of thin layer chromatography (TLC). -------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

الدراسة الحالية تتمثل في التوصيف الكيميائي الحيوي للأميلاز المعزولة من الفطريات الشعاعية الموجودة في التربة في منطقة سوق أهراس. وهكذا ، تم اختبار نشاط التحلل النشاء لخمسة سلالات من البكتيريا الشعاعية ، على وجه الخصوص: S213 ، S331 ، S351 ، S551 ، S552 بهدف إنتاج إنزيم اميلاز. تم إجراء ذلك من خلال اختبارين: اختبار نوعي (اختبار اليود) والذي يجعل من الممكن مراقبة التحلل المائي للنشاء بواسطة الإنزيم على الوسط الصلب. (الهالات) ،يتم تصنيف ترتيب نشاط السلالات عن طريق نسبة القطر ، وهذه هي حالة سلالة S331. يتم تأكيد هذه النتائج من خلال اختبار القياس اللوني الكمي عن طريق تحديد مظهر السكريات المختزلة بعد التحلل المائي للنشاء (اختبار نشاط انزيم بواسطة كاشف DNS. جعلت هذه الاختبارات المختلفة من الممكن اختيار السلالة الأكثر نشاطًا. هذه هي سلالة S331 التي كانت موضوع دراسة أكثر تعمقًا. كما تم إنتاج إنزيم اميلاز على وسط سائل YST قائم على النشاء. وبعد ذلك ، التنقية الجزئية للأنزيم اميلاز أجري باستخدام طريقة تجزئة الأسيتون 20٪. تم إجراء التوصيف الكيميائي الحيوي للجزء الأنزيمي المعزول ، فيما يتعلق بالمعايير الفيزيائية والكيميائية التالية: درجة الحموضة ، درجة الحرارة ، التأثير وأخيراً ،تم إجراء محاولة لتحديد طريقة هجوم الإنزيم بواسطة طريقة كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- La présente étude est consacrée à la caractérisation biochimique des amylases isolées à partir des actinomycètes telluriques autochtones de la région de Souk Ahras. Ainsi, l'activité amylolytiques de cinq souches d’Actinobactéries, notamment : S213, S331, S351, S551, S552 a été testée dans le but de produire des enzymes amylolytiques. Cela a été effectué par deux tests : Un test qualitatif (le test d’iodine) qui permet d’observé l’hydrolyse de l’amidon par les enzymes amylolytiques sur le milieu solide Gélose nutritif (GN) à base d'amidon qui permet d’observer des zones claire autours des colonies (halos), Le rapport de diamètre a permis de classer les souches par ordre d’activité. Une souche semble être plus active par rapport aux autres souches actinomycètes, c’est le cas de la souche S331. Ces résultats sont confirmés par un test colorimétrique quantitatif par détermination de l'apparition des sucres réducteurs suite à l’hydrolyse de l’amidon (Dosage d’activité amylolytiques par la méthode de Miller au réactif de DNS. Ces différents tests ont permis de choisir la souche la plus active. Il s'agit de la souche S331 qui a fait l'objet d'une étude plus approfondie. Egalement, la production des enzymes amylolytiques a été procédée sur milieu liquide spécifique YST à base d’amidon. Par la suite, un protocole de purification partielle des enzymes amylolytiques a été réalisé grâce à la méthode de fractionnement à l’acétone à 20%.la caractérisation biochimique de la fraction enzymatique isolée à été effectué, concernant les paramètres physicochimiques suivants : pH, Température, effet de sels. Finalement, une tentative de détermination du mode d'attaque de l'enzyme a été menée par la méthode de chromatographie sur couche mince (CCM).