Criblage des protéases chez des souches d’actinomycètes

Abstract

As part of the research and production of proteolytic enzymes in microorganisms, five strains of actinomycetes were isolated from the soil medium of the Souk Ahras region. The different morphological and biochemical characters of the strains studied allowed them to be linked to actinomycetes, Gram-positive filamentous bacteria. The screening of the proteolytic activity of the mesophilic actinomycete strains was carried out on different solid culture media based on different natural protein substrates. Detection of enzymatic activity on solid medium reveals clear halos around the colonies. The results of this screening show that the S551 strain exhibits the best proteolytic activity. The proteolytic activity of strains of actinomycetes on a liquid milk-based medium was evaluated by determining the concentration of peptides soluble in TCA. The results obtained made it possible to select the strain S551 as the most protease producer with an activity of 428.09 IU/ml. This study made it possible to confirm the results of the qualitative tests carried out previously. To test the activity of keratinolytic proteases, the isolates are cultivated on a solid medium based on feather meal as the sole source of carbon and nitrogen. The results obtained show that the S551 strain can easily degrade feather meal and gives the best action on this substrate by secretion of keratinases. The estimation of keratinolytic activity on liquid medium based on FBM medium revealed an activity greater than 204.36 IU/ml also for strain S551. ----------------------------------------------------------------------------------------------------- في إطار البحث وإنتاج الإنزيمات المحللة للبروتين في الكائنات الحية الدقيقة ، تم عزل خمس سلالات من الأكتينوميسات من تربة منطقة سوق أهراس. حيث سمحت الخصائص المورفولوجية والبيوكيميائية للسلالات المدروسة بربطها بالبكتيريا الخيطية إيجابية الجرام. تم إجراء فحص نشاط تحلل البروتين لسلالات الأكتينوميسات ذات الحرارة المعتدلة في أوساط زراعة صلبة متنوعة بناءًا على ركائز بروتينية طبيعية مختلفة. كشف النشاط الأنزيمي في الأوساط الصلبة عن وجود هالات شفافة حول المستعمرات البكتيرية. كما بينت نتائج هذا الفحص أن السلالة S551 قدمت أفضل نشاط لتحلل البروتين. تم تقييم نشاط تحلل البروتين لسلالات الأكتينوميسات في وسط أساسه الحليب السائل من خلال تحديد تركيز الببتيدات القابلة للذوبان في ال TCA. حيث أظهرت النتائج التي تم الحصول عليها أن السلالة S551 تعتبر هي الأكثر انتاجا للبروتياز بنشاط تم تقديره ب 428.09 وحدة دولية/مل. أتاحت هذه الدراسة تأكيد نتائج الاختبارات النوعية التي أجريت سابقاً. من أجل اختبار نشاط البروتياز الكيراتيني ، تم زرع السلالات في وسط صلب أساسه مسحوق الريش كمصدر وحيد للكربون و الأزوت. أظهرت النتائج التي تم الحصول عليها أن سلالة S551 يمكن أن تحلل الريش بسهولة و تعطي أفضل نشاط على هذه الركيزة عن طريق إفراز الكيراتيناز. أظهر تقدير نشاط الكيراتين في الوسط السائل أساسه FBM نشاطا أكبر من 204.36 وحدة دولية/مل أيضًا للسلالة S551. ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- Dans le cadre de la recherche et la production des enzymes protéolytiques chez les microorganismes, cinq souches d’actinomycètes ont été isolées à partir du milieu tellurique de la région de Souk Ahras. Les différents caractères morphologiques et biochimiques des souches étudiées ont permis de les rattachées aux actinomycètes bactéries filamenteuses à Gram positif. Le criblage de l’activité protéolytique des souches d’actinomycètes mésophiles a été réalisé sur différents milieux de culture solide à base des différents substrats protéiques naturels. La détection de l’activité enzymatique sur milieu solide fait apparaître des halos clairs autour des colonies. Les résultats de ce criblage montrent que la souche S551 présente la meilleure activité protéolytique. L’activité protéolytique des souches d’actinomycètes sur milieu liquide à base de lait a été évaluée par la détermination de la concentration des peptides soluble dans le TCA. Les résultats obtenus ont permis de sélectionner la souche S551 comme la plus productrice des protéases avec une activité de 428.09 UI/ml. Cette étude a permis de confirmer les résultats des tests qualitatifs réalisés précédemment. En vue de tester l’activité des protéases kératinolytiques les isolats sont cultivés sur milieu solide à base de farine de plumes comme seule source de carbone et d’azote. Les résultats obtenus montrent que la souche S551 peut dégrader facilement la farine de plumes et donne la meilleure activé sur ce substrat par sécrétion des kératinases. L’estimation de l’activité kératinolytique sur milieu liquide à base de milieu FBM a révélé une activité supérieure à 204.36 UI/ml également pour la souche S551.