Criblage des polysaccharidases chez une souche d’actinomycète thermo-halophile DATM.

Abstract

Polysaccharides are very varied and numerous; their degradation requires great diversity of enzymes. Bacteria, mainly actinomycetes, are capable to produce high-performance enzymatic systems acting synergistically to degrade these polysaccharides. Among these glycoside hydrolase type enzymes are amylases, cellulases, xylanases and chitinases which have been particularly studied during this work. As part of the research and screening of polysaccharidases, a strain of thermo-halophilic actinomycete DATM was isolated from a Sebkha (a very salty soil) in the willaya. of M’Sila thus their polysaccharide activity was sought. The different results obtained by qualitative methods, based on coloring phenomena using specific reagents and by quantitative methods based on the search for reducing sugars (DNS method) showed that the actinomycete strain DATM is hyper producer of amylolytic enzymes with an activity of the order of 1163.25 IU/ml. So we chose amylases for further study. Partial purification of amylolytic enzymes was also carried out by the acetone fractionation method. This results in an increase in the specific activity of the isolated enzymatic fraction following fractionation. During the biochemical characterization we obtained maximum enzymatic activity in two fractions. the first fraction has an optimum pH of 5 and an optimum temperature of 40°C. While the second fraction gives maximum activity at an optimum pH of 9 and an optimum temperature of 60°C using water-soluble starch as a carbon source. These different results obtained would be favorable to the use of this enzyme in the industrial sector. ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------ السكريات متنوعة للغاية ومتعددة، ويتطلب تحللها مجموعة متنوعة من الانزيمات. البكتيريا، وخاصة الاكتينوميسات، قادرة على إنتاج أنظمة أنزيمية فعالة تعمل بشكل تآزري لتحلل هذه السكريات. ومن بين هذه الإنزيمات من نوع جليكوسيد هيدرولاز نجد الأميلاز، والسيلولاز، والزيلاناز، والكيتيناز والتي تمت دراستها بشكل خاص خلال هذا العمل. في سياق البحث و انتقاء الانشطة الانزيمية، تم عزل سلالة البكتيريا الشعاعية المحبة للحرارة DATM من السبخة (تربة شديدة الملوحة) في ولاية المسيلة وبالتالي تم البحث عن نشاط السكاريد الخاص بهم. أظهرت النتائج المختلفة التي تم الحصول عليها بالطرق النوعية المبنية على ظواهر التلوين باستخدام كواشف محددة وبالطرق الكمية المبنية على البحث عن السكريات المختزلة (طريقة DNS) أن سلالة الاكتينوميست DATM منتجة بشكل مفرط لإنزيمات الأميلاز مع نشاط برتبة 1163.25 وحدة دولية/مل. لذلك اخترنا الأميلاز من اجل دراسة اخرى أكثر تعمقا. تم أيضًا إجراء التنقية الجزئية لإنزيمات الأميلاز بواسطة طريقة تجزئة الأسيتون. يؤدي هذا إلى زيادة النشاط المحدد للجزء الأنزيمي المعزول. أثناء دراسة الخصائص البيوكيميائية تحصلنا على أقصى قدر من النشاط الأنزيمي في جزأين. يحتوي الجزء الأول على درجة حموضة مثالية تبلغ 5 ودرجة حرارة مثالية تبلغ 40 درجة مئوية. بينما يعطي الجزء الثاني أقصى نشاط عند درجة حموضة مثلى 9 ودرجة حرارة مثلى 60 درجة مئوية باستخدام النشا القابل للذوبان في الماء كمصدر للكربون. هذه النتائج المختلفة التي تم الحصول عليها ستكون مناسبة لاستخدام هذا الانزيم في القطاع الصناعي. -------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- Les polysaccharides sont très variés et nombreux, leur dégradation nécessite une grande diversité d’enzymes. Les bactéries essentiellement les actinomycètes sont capables de produire des systèmes enzymatiques très performants agissant en synergie pour dégrader ces polysaccharides. Parmi ces enzymes de type glycosides hydrolases en trouve les amylases, les cellulases, les xylanases et chitinase qui ont été particulièrement étudiées au cours de ce travail. Dans le cadre de la recherche et le criblage des polysaccharidases, une souche d’actinomycète thermo-halophile DATM a été isolée à partir d’une Sebkha (une terre très salée) de la willayade M’Sila ainsi leur activité polysaccharidique a été recherchée. Les différents résultats obtenus par des méthodes qualitatives, basées sur des phénomènes de coloration à l’aide des réactifs spécifiques et par des méthodes quantitatives basé sur la recherche des sucres réducteurs (méthode de DNS) ont montré que la souche d’actinomycète DATM est hyper productrice des enzymes amylolytiques avec une activité de l’ordre de1163.25 UI/ml. Donc nous avons choisi les amylases pour une étude plus approfondie. La purification partielle des enzymes amylolytiques a été également effectue par la méthode de fractionnement à l’acétone. Ceci se traduit par une augmentation de l’activité spécifique de la fraction enzymatique isolée suit au fractionnement. Lors de la caractérisation biochimique nous avons obtenu une activité enzymatique maximale dans deux fractions. La première fraction a un pH optimum de 5 et une température optimale de 40°C. Alors que la deuxième fraction donne un maximum d’activité a un pH optimum de 9 et une température optimale de 60°C en utilisant l’amidon hydrosoluble comme source de carbone. Ces différents résultats obtenus seraient favorables à l’utilisation de cette enzyme dans le secteur industriel.